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五年western blot 實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)總結(jié)
2016-03-11
1.抗體的選擇對(duì)于國(guó)內(nèi)的大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室來(lái)講，做westernblot實(shí)驗(yàn)選擇抗體是個(gè)頭疼的問(wèn)題。原因很簡(jiǎn)單，買(mǎi)進(jìn)口抗體捉襟見(jiàn)肘，買(mǎi)國(guó)產(chǎn)抗體得需要大無(wú)畏的勇氣，對(duì)于我所在的蘭州地區(qū)的實(shí)驗(yàn)者而言，感觸尤深。在這五年的westernblot實(shí)驗(yàn)歷程里，我先后用過(guò)進(jìn)口抗體，進(jìn)口抗體國(guó)內(nèi)分裝包裝，國(guó)產(chǎn)抗體，質(zhì)量良莠不齊。進(jìn)口抗體一般不會(huì)出現(xiàn)閃失：abcam品種全，質(zhì)量過(guò)硬，但價(jià)高（3400元/100微升），而且說(shuō)是100微升，但多能吸出來(lái)90微升；的價(jià)貴；比較有性價(jià)比的是CST的抗體，現(xiàn)...
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蛋白質(zhì)分析技術(shù)
2016-03-11
蛋白質(zhì)分析技術(shù)(WesternBlot、ELISA、免疫熒光與免疫組化技術(shù))1原理：將通過(guò)聚丙烯酰胺凝膠電泳分離的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素或PVDF膜上，然后與能特異性識(shí)別待檢蛋白的抗體進(jìn)行反應(yīng)，洗滌去除沒(méi)有結(jié)合的特異性抗體后，加入標(biāo)記的、能識(shí)別特異性抗體的種屬特異性抗體，反應(yīng)一段時(shí)間后再次洗滌去除非特異性結(jié)合的標(biāo)記抗體，加入適合標(biāo)記物的檢測(cè)試劑進(jìn)行顯色或發(fā)光等，觀察有無(wú)特異性蛋白條帶的出現(xiàn)，也可通過(guò)條帶的密度大小來(lái)進(jìn)行特異性蛋白的半定量。2操作過(guò)程SDS-PAGE電泳→轉(zhuǎn)膜（...
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簡(jiǎn)要介紹細(xì)胞凍存管的使用
2016-02-24
凍存管又名冷凍管，是常用的實(shí)驗(yàn)耗材，多用于生物、醫(yī)藥、食品等行業(yè)。凍存管一般用作實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞的低溫保藏。凍存管介紹：凍存管一般按容量劃分為0.5ml，1.0ml，1.5ml，1.8ml，2.0ml，4ml，5ml，7ml，10ml等。一般的凍存管不能進(jìn)入液氮里，只有特殊材料處理的才可以放入。同時(shí)凍存管還有雙層的和層的帶硅膠墊和沒(méi)有硅膠墊的等種種，還有無(wú)色和雜色及各種純色等不同。如果需要進(jìn)入液氮保藏的就要選擇密封的耐低溫的凍存管，還要認(rèn)清所購(gòu)買(mǎi)的凍存管是否是無(wú)菌以及無(wú)DNA,RN...
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標(biāo)本處理的幾個(gè)常見(jiàn)問(wèn)題
2016-02-19
組織標(biāo)本處理的步驟：取材、固定、脫水、包埋、切片、染色-HE組織標(biāo)本的處理是簡(jiǎn)單基本的工作程序，看起來(lái)簡(jiǎn)單，認(rèn)真做起來(lái)會(huì)有很多問(wèn)題；1、取材的問(wèn)題：厚度：3mm，大?。?x1.5cm；過(guò)厚過(guò)大固定不透，脫水不透，影響切片染色。2、固定液：常用福爾馬林，如果標(biāo)本做免疫組化等其他實(shí)驗(yàn)，用中性福爾馬林固定更好；3、固定液體量：要與標(biāo)本容積比：1:9；不可將同一動(dòng)物的內(nèi)臟放置在一個(gè)容器（常用的是試管），固定不透，夏天會(huì)發(fā)生腐敗細(xì)胞壞死自溶，不能區(qū)分是毒性作用所致還是溫度高所致。4、固...
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組織芯片的研究進(jìn)展及應(yīng)用
2016-02-19
現(xiàn)代科學(xué)的發(fā)展，有兩類(lèi)產(chǎn)品的使用，或者叫發(fā)明應(yīng)用，對(duì)現(xiàn)代人類(lèi)有著劃時(shí)代的貢獻(xiàn)。其一是微處理器使我們的生活方式發(fā)生了根本變化，它是計(jì)算機(jī)和許多家電等相關(guān)產(chǎn)品的心臟，它改變了我們的整個(gè)經(jīng)濟(jì)、文化生活，影響了整個(gè)人類(lèi)的社會(huì)發(fā)展，已經(jīng)進(jìn)入每一個(gè)家庭，給人類(lèi)帶來(lái)了巨大的財(cái)富；另外一類(lèi)產(chǎn)品－生物芯片給人類(lèi)帶來(lái)的影響可能更大。生物芯片是20世紀(jì)80年代末發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)生物醫(yī)藥等領(lǐng)域的高新技術(shù)，通過(guò)生物芯片上集成的成千上萬(wàn)的密集排列的分子微陣可以實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞、蛋白質(zhì)、DNA以及其他生物組份的準(zhǔn)...
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索萊寶hanks液的作用及配置方法簡(jiǎn)介
2016-01-26
Hank's液是生物醫(yī)學(xué)試驗(yàn)中常見(jiàn)的平衡鹽溶液（BSS）之一，簡(jiǎn)稱(chēng)HBSS。主要用于配制培養(yǎng)液，稀釋劑和細(xì)胞清洗液，而不能單獨(dú)作為細(xì)胞，組織培養(yǎng)液。D-Hank's與Hank's的一個(gè)主要區(qū)別在于前者不含有鈣和鎂離子，因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。Hanks液的配制原液ANaCl160gMgSO4·7H2O2gKCl8gMgCl2·6H2O2gCaCl22.8g溶于1000ml雙蒸水原液B（1）Na2HPO4·12H2O3.04gKH2PO41.2g葡萄糖20.0g...
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索萊寶臺(tái)盼藍(lán)染色法的原理及操作步驟
2016-01-05
臺(tái)盼藍(lán)染液是細(xì)胞活性染料，常用于檢測(cè)細(xì)胞膜的完整性。細(xì)胞損傷或死亡時(shí)，臺(tái)盼藍(lán)可穿透變性的細(xì)胞膜，與解體的DNA結(jié)合，使其著色。而活細(xì)胞能阻止染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。故可以檢測(cè)細(xì)胞是否存活。臺(tái)盼藍(lán)染色法的原理正常的活細(xì)胞，胞膜結(jié)構(gòu)完整，能夠排斥臺(tái)盼藍(lán)，使之不能夠進(jìn)入胞內(nèi)；而喪失活性或細(xì)胞膜不完整的細(xì)胞，胞膜的通透性增加，可被臺(tái)盼藍(lán)染成藍(lán)色。通常認(rèn)為細(xì)胞膜完整性喪失，即可認(rèn)為細(xì)胞已經(jīng)死亡，這與中性紅作用相反。因此，借助臺(tái)盼藍(lán)染色可以非常簡(jiǎn)便、快速地區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞。臺(tái)盼藍(lán)是組織和細(xì)胞培...
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糖原PAS染色液（過(guò)碘酸-雪夫染色液）染色原理
2016-01-05
糖原染色是病理學(xué)中常規(guī)的染色方法之一，不僅能夠顯示糖原，還能顯示中性黏液性物質(zhì)和某些酸性物質(zhì)以及軟骨、垂體、霉菌、真菌、色素、淀粉樣物質(zhì)、基底膜等。過(guò)碘酸(又稱(chēng)高碘酸)是一種強(qiáng)氧化劑，它能氧化糖類(lèi)及有關(guān)物質(zhì)中的1，2-乙二醇基，使之變?yōu)槎┡cSchiff試劑能結(jié)合成一種品紅化合物，產(chǎn)生紫紅色。索萊寶糖原PAS染色液特點(diǎn)是采用solarbio*配方技術(shù)，大大增強(qiáng)了染色效果；性能穩(wěn)定，特異性強(qiáng)；操作簡(jiǎn)捷，僅需1h左右。操作步驟：1、染色步驟1)切片脫蠟水；2)高碘酸液處理5-...
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