封閉用馬血清的定義、處理工藝和作用機制

更新時間：2025-12-12

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封閉用馬血清的定義、處理工藝和作用機制

封閉用馬血清是從健康馬血液中分離、經(jīng)嚴格工藝處理（滅活、除菌、去雜蛋白）制成的生物試劑，核心用途是在免疫檢測實驗中阻斷非特異性結(jié)合，減少背景干擾，提高實驗結(jié)果的特異性與準確性。其本質(zhì)是不含目標抗體/抗原的天然蛋白混合物，通過占據(jù)實驗載體（如硝酸纖維素膜、酶標板、組織切片）上的空白位點，避免檢測抗體/抗原與載體非特異性結(jié)合，從而凸顯特異性信號。

核心處理工藝與質(zhì)量標準：

滅活處理：56℃水浴30分鐘，破壞血清中的補體系統(tǒng)（避免補體參與免疫反應(yīng)干擾結(jié)果）；

除菌純化：經(jīng)0.22μm濾膜過濾，去除細菌、真菌等微生物，確保無菌性；

去雜處理：部分產(chǎn)品會去除高豐度雜蛋白（如白蛋白聚合物），降低非特異性結(jié)合風險；

質(zhì)量指標：蛋白濃度（通常5-10mg/mL）、無菌性、無支原體、內(nèi)毒素含量低（＜10EU/mL）、無目標抗原/抗體交叉反應(yīng)。

2.封閉用馬血清的核心作用機制

免疫檢測實驗中（如WesternBlot、ELISA），載體表面（如酶標板）除了固定的目標抗原外，還存在大量空白位點。若不進行封閉，檢測抗體（一抗/二抗）可能通過疏水作用、靜電作用與這些空白位點結(jié)合，導(dǎo)致“假陽性”或高背景信號（如膜上出現(xiàn)非特異性條帶、酶標板OD值偏高）。

封閉用馬血清的作用機制：

占據(jù)空白位點：血清中的白蛋白、球蛋白等天然蛋白，通過非特異性結(jié)合覆蓋載體表面的空白區(qū)域，形成“屏障”；

不干擾特異性結(jié)合：馬血清中不含實驗?zāi)繕说目乖?抗體，不會與檢測抗體、目標抗原發(fā)生特異性反應(yīng)；

降低背景噪音：阻斷檢測抗體與載體的非特異性結(jié)合，使實驗結(jié)果的“信號-背景比”顯著提升，讓特異性條帶/信號更清晰。

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封閉用馬血清的定義、處理工藝和作用機制

封閉用馬血清的定義、處理工藝和作用機制