發(fā)布時(shí)間:2026/1/8
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本公司生產(chǎn)的SDS-PAGE凝膠制備試劑盒是按照經(jīng)典方法配制而成。本試劑盒提供了配制SDS-PAGE凝膠所需的各種試劑,用戶只需自備制膠器具和蒸餾水,即可配制PAGE膠。本試劑盒可配制不同規(guī)格、不同聚合度的PAGE膠(即聚丙烯酰胺凝膠) 約25/50塊。
注意事項(xiàng):
1. PAGE膠促凝劑和10%PAGE膠凝固劑最后加,在加入前需混勻前面所加試劑。10%PAGE膠凝固劑溶液在4℃有效期為一周;PAGE膠促凝劑易揮發(fā),使用后請(qǐng)蓋緊瓶蓋。在常溫下膠30分鐘內(nèi)可以凝固,如溫度過(guò)低,可放37℃溫箱凝固。灌完分離膠后,輕輕的加1mL ddH2O封上層,膠凝固后可見到分界線。灌濃縮膠前,先傾去水層,再用吸水紙吸干。濃縮膠灌好后立刻插入梳子。濃縮膠凝固后,放入電泳液中(讓電泳液漫過(guò)加樣孔),輕輕的撥出梳子,可防加樣孔變形。
2. 配制量可按上表等比加減。如果所用膠濃度與上面不同,可自行調(diào)整,主要是調(diào)整30% 制膠液的量(需要濃度×總體積/30%),最后用水補(bǔ)足總體積。
配膠說(shuō)明:
1. 先在PAGE膠凝固劑干粉中加入蒸餾水或去離子水(每克PAGE膠凝固劑需加水10mL)配置成10%溶液,將溶液分裝成小體積后凍存于-20℃,制備凝膠時(shí)融化后使用。4℃保存有效期為一周。檢測(cè)SDS溶液是否澄清,若出現(xiàn)絮狀物或沉淀可放37℃片刻至溶解,不影響效果。
2. 根據(jù)目標(biāo)蛋白分子量大小,選取凝膠濃度,按下表配制。先配分離膠,再配濃縮膠。
| 分離膠15% | 分離膠12% | 分離膠10% | 分離膠8% | 濃縮膠5% | |
| 總體積 | 10mL | 10mL | 10mL | 10mL | 5mL |
| 30%Acr/Bis(29:1) | 5mL | 4mL | 3.3mL | 2.7mL | 0.83mL |
| 1M Tris-HCI(PH6.8) | 0 | 0 | 0 | 0 | 0.625mL |
| 1.5M Tris-HCI(PH8.8) | 2.5mL | 2.5mL | 2.5mL | 2.5mL | 0 |
| 10%SDS | 100μL | 100μL | 100μL | 100μL | 50μL |
| 10%PAGE膠凝固劑 | 100μL | 100μL | 100μL | 100μL | 75μL |
| PAGE膠促凝劑 | 10μL | 10μL | 10μL | 10μL | 7.5μL |
| ddH20 | 2.3mL | 3.3mL | 4.0mL | 4.6mL | 3.42mL |
| 最佳分離范圍 | 10-40kD | 12-60 kD | 20-80 kD | 30-90kD |
注意事項(xiàng)
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