胃蛋白酶測定試劑盒 微量法

測定意義：胃蛋白酶由胃粘膜主細胞分泌，分解食物中蛋白質(zhì)成小肽段。一般用于神經(jīng)性低酸癥的鑒別，慢性胃炎、慢性胃擴張、慢性十二指腸炎等癥狀時也會引起胃蛋白酶分泌的減少。

測定原理：胃蛋白酶可催化血紅蛋白水解，水解產(chǎn)物與福林試劑反應(yīng)后顯藍色；一定范圍內(nèi)，其顏色的深淺與胃蛋白酶活性呈正比。

需要的儀器，耗材:可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、研缽、冰和蒸餾水。 

胃蛋白酶測定試劑盒 微量法

1、用石英比色皿 Solarbio 第 2 頁，共 2 頁（1） 按樣本蛋白濃度計算：活性單位（U）定義：37℃下每毫克蛋白每分鐘催化血紅蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸為一個酶活單位。胃蛋白酶（U/mg prot）=（?A÷?÷d×V 反總）÷（Cpr×V 樣本）÷T = 0.786×?A÷Cpr （2） 按樣本鮮重計算：活性單位（U）定義：37℃下每克組織每分鐘催化血紅蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸為一個酶活單位。胃蛋白酶（U/g）胃蛋白酶（U/g 鮮重）=（?A÷?÷d×V 反總）÷（W×V 樣本÷V 提）÷T =0.786×?A÷W。 Cpr：粗酶液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測定；V 反總：反應(yīng)總體積，0.22mL；V 提：提取液體積，1mL；T：催化反應(yīng)時間，10min；V 樣本：加入樣本體積，0.02mL；?：酪氨酸吸光系數(shù)，1.4? mol-1·mL·cm-1 ；d：光程，1cm。 2、用 96 孔 UV 板按樣本蛋白濃度計算：活性單位（U）定義：37℃下每毫克蛋白每分鐘催化血紅蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸為一個酶活單位。胃蛋白酶（U/mg prot）=（?A÷?÷d×V 反總）÷（Cpr×V 樣本）÷T = 1.57×?A÷Cpr （3） 按樣本鮮重計算：活性單位（U）定義：37℃下每克組織每分鐘催化血紅蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸為一個酶活單位。胃蛋白酶（U/g）胃蛋白酶（U/g 鮮重）=（?A÷?÷d×V 反總）÷（W×V 樣本÷V 提）÷T =1.57×?A÷W。 Cpr：粗酶液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測定；V 反總：反應(yīng)總體積，0.22mL；V 提：提取液體積，1mL；T：催化反應(yīng)時間，10min；V 樣本：加入樣本體積，0.02mL；?：酪氨酸吸光系數(shù)，1.4? mol-1·mL·cm-1 ；d：光程，0.5cm。

提取液：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。試劑一：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前加入 10 mL 試劑二充分溶解。試劑二：液體 15mL×1 瓶，4℃保存。試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 10mL 蒸餾水充分溶解。